顯色

取出SDS-聚丙烯酰胺凝膠，經超純水清洗2次，每次分鐘，4塊膠分別按4種不同的染色方法顯色。下列每步操作皆在搖床上進行。4種染色法成份組成及操作如下：ELISA試劑盒

①傳統考馬斯亮藍染色法：清洗后的凝膠經固定液(45.4%甲醇、4.6%乙酸)固定小時，隨后用染色液(45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.% CBB G250)著色過夜，再經洗脫液(5%甲醇、7.5%乙酸)過夜脫色至背景清晰。

②膠體考馬斯亮藍染色法(colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB)染色法：凝膠先經超純水漂洗后，再用colloidal Coomassie blue G250染色液(.6%磷酸、8%硫酸銨、0.02% CBB G250、20%乙醇)著色過夜，洗脫液為超純水，換液3～4次直至背景清晰。ELISA試劑盒

③改良考馬斯亮藍染色法(modified Coomassie brilliant blue，mCBB)染色法[6];操作方法同膠體考馬斯亮藍染色法，只是染色液組成不同(0.2% CBB G250、0%硫酸銨、0%磷酸、20%乙醇)，著色小時即可。

④銀染(silver staining)：凝膠漂洗后先被固定液(50%甲醇+ 5%乙酸)固定小時，隨后分別用50%甲醇和超純水清洗各0分鐘，0.02 mg/L Na2S2O3 致敏分鐘，超純水清洗2次，每次分鐘，再用預冷的0.5% AgNO3著色20分鐘，超純水再次清洗2次，每次分鐘，2% Na2CO3 + 0.04% 甲醛顯色20～30秒，當溶液變黃以后除去，換新鮮的溶液后繼續顯色直至顯色適度后，以5%乙酸終止顯色。

操作的安全性與簡便性

由于有機溶劑的相似作用，我們在改進的考馬斯亮藍染色法里，拋棄有毒的甲醇及氣味難聞的乙酸，同時在步驟上，我們采用染色和固定一步法進行，減少了*步固定的時間，僅用超純水清洗，縮短了整個染色及人與有毒物接觸的時間。結果顯示，兩種考馬斯亮藍染色法獲得的圖像背景不比傳統考馬斯亮藍染色法差。

通過我們的摸索及比較分析認為，用低毒的乙醇替代甲醇，采用高酸、高離子、快速而簡便的改良考馬斯亮藍染色法能獲得低背景、高靈敏度、兼容質譜的蛋白質顯示，能為蛋白質組研究、雙向凝膠電泳技術的蛋白質分析提供質量的保證。ELISA試劑盒

綜上比較，作為蛋白質染色的方法，考馬斯亮藍法操作便捷、兼容性高，但耗時較長。經改良的考馬斯亮藍法的檢測靈敏性大大提高，甚至不輸銀染法。而銀染法雖然耗時短，但步驟較多，且兼容性低。