ELISA試劑盒可根據實驗工作量和難易程度,采用不同的標本,運用不同的操作方法。在對該試劑盒加入終止液時,應避免起泡,以免造成假陽性,終止液加入后應輕輕振板,使終止液與板孔內溶液充分混勻;酶標板讀數前,應輕輕拭去板底的水跡和污物,保證板底干潔,以免影響讀數;應根據底物液選擇合適的讀數波長,如TMB一般選擇450nm波長,PNPP一般選擇405nm波長等;加入終止液后,應盡快讀板,酶標板內顏色會隨著終止時間的延長而變淡。
該試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗,預先被捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關。需要用酶標儀在450nm波長下測定吸光度,計算樣品濃度。
應嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。預處理后的樣本無需稀釋,直接取0μL加樣即可。ELISA試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。