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降鈣素ELISA試劑盒測(cè)定樣品中人降鈣素原水平

更新時(shí)間:2021-01-22 點(diǎn)擊量:463
  降鈣素ELISA試劑盒是一種由32個(gè)氨基酸組成的線性多肽激素,在人體內(nèi),主要由甲狀腺的濾泡旁細(xì)胞(也稱為C細(xì)胞)產(chǎn)生,在其他動(dòng)物中,由末咽體產(chǎn)生,它的作用是降低血鈣(Ca2+),抵抗甲狀旁腺激素(PTH),在魚類、爬行動(dòng)物、鳥類和哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了降鈣素。
  降鈣素是通過蛋白水解切割較大的前多肽原形成,該前多肽原是基因的產(chǎn)物,在功能上它是PTH和3的拮抗劑,高濃度的降鈣素可能通過對(duì)腎小管的作用增加尿鈣和磷酸鹽的排泄,進(jìn)而導(dǎo)致明顯的低鈣血癥。在骨骼的保護(hù)中,降鈣素避免鈣動(dòng)員過程中(如懷孕,尤其是哺乳期)骨骼鈣流失,此外,降鈣素抑制大鼠和猴子的攝食,可能具有調(diào)節(jié)攝食和食欲中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。
  每孔加入250μl檢測(cè)緩沖液,室溫孵育2小時(shí),或者2 - 8°C封閉過夜,封閉后的酶標(biāo)板可置于2-8°C貯存?zhèn)€星期,或者-20°C貯存2個(gè)月,封閉后的酶標(biāo)板若要立即使用,請(qǐng)先洗滌兩次,然后加入樣本。撕掉封板膜、棄掉孔中液體,每孔加入約300μ的洗液,洗滌6次,每次洗完都要*移除孔中溶液,條件允許的話,加入洗液后300轉(zhuǎn)/分鐘振蕩60秒,注意請(qǐng)勿接觸酶標(biāo)板的表面。每次洗滌,在吸水紙上拍干多余的洗液,洗板完成后請(qǐng)立即使用酶標(biāo)板,或者顛倒置于濕的吸水紙上不得超過5分鐘,不要讓酶標(biāo)板干燥。
  降鈣素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù),測(cè)定樣品中人降鈣素原水平,向預(yù)先包被了抗人降鈣素原抗體的酶標(biāo)孔中,加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本,溫育后,加入標(biāo)記的抗降鈣素原抗體,再與HRP標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入顯色底物TMB,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色,在450 nm處測(cè)定反應(yīng)孔樣品吸光度值,樣本中的人降鈣素原濃度與OD值成正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中人降鈣素原的濃度。

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