豬ELISA試劑盒具有敏感性高,特異性強,快速等特點,目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥、真菌殘留檢測,該方法從加樣、洗板、顯色到讀數(shù)步驟繁多,其中任何一步控制不好都可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,在實際測定操作中要注意以下幾點。
.試劑盒回溫
ELISA檢測試劑盒為冷藏(2℃-8℃)保存。從冰箱拿出來后,先不要急于打開試劑盒,要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無冷凝水,檢測所用的試劑需充分混勻且*溶解后再用,提前~2小時取出試劑盒,放在室溫中;或在預(yù)設(shè)25℃恒溫培養(yǎng)箱中平衡30分鐘~60分鐘。
2.環(huán)境溫度的控制
)實驗室應(yīng)配備溫濕度表,且確保定期計量。
2)根據(jù)天氣情況設(shè)定實驗室空調(diào)制冷或加溫功能,待室溫穩(wěn)定且無干擾的條件下再開始檢測流程。
3)選用帶溫控裝置的孵育儀器,如恒溫孵育器、恒溫培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。注意要提前開啟預(yù)熱。
豬ELISA試劑盒的操作方法:
.包被:在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育小時,然后洗滌。
3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體0.ml。
4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入底物溶液0.ml,37℃0~30分鐘。
5.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入酸0.05ml。
6.結(jié)果判定:豬ELISA試劑盒可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或較淺,依據(jù)所呈顏色的深淺。