河蟹顫抖病病毒PCR檢測(cè)試劑盒使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
產(chǎn)品名稱：河蟹顫抖病病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Chinese Mitten Crabs Trembling Disease VirusRTPCR
規(guī)格：詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
類別:PCR檢測(cè)試劑盒
運(yùn)輸：低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
用途：生化實(shí)驗(yàn)，合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑：樣品 RNA。

性能指標(biāo)：點(diǎn)擊了解更多PCR檢測(cè)試劑盒。
.河蟹顫抖病病毒PCR檢測(cè)試劑盒試劑盒檢測(cè)特異性為00%
2. 檢測(cè)試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個(gè)月
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素：
河蟹顫抖病病毒PCR檢測(cè)試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 5-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至0kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.～umol或0～00pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
?標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Salicylate (AS)  CAS:9-36-8

棕櫚油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Palmitoleate   CAS:20-25-8

棕櫚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Palmitate   CAS:2-39-0

油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Oleate   CAS:2-62-9

肉豆蔻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Myristate   CAS:24-0-7

亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Linolenate   CAS:30-00-8

甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Linoleate   CAS:2-63-0

月桂酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Laurate   CAS:-82-0

甲基異丁基甲酮標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Isobutyl Ketone  CAS:08-0-

2-丁酮¤標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Ethyl Ketone  CAS:78-93-3

辛酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Caprylate   CAS:--5

己酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Caproate   CAS:06-70-7

癸酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Caprate   CAS:0-42-9

甲基亞芐亞基樟腦標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Benzylidene Camphor  CAS:3686-47-9

甲醇標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Methyl Alcohol   CAS:67-56-
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