NCI-H66（大細(xì)胞肺癌細(xì)胞）具體操作
取出凍存管： 根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。
從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號。
初學(xué)者易犯錯誤：水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時間延長。
離心前忘記平衡，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：將水浴鍋預(yù)熱至37℃
NCI-H66（大細(xì)胞肺癌細(xì)胞）用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶 等。
迅速解凍：

迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。
.約-2min后

凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。
平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
制備細(xì)胞懸液：吸棄上清液。
向離心管內(nèi)加入0ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。
活化與細(xì)胞復(fù)蘇    收到細(xì)胞株包裹時， 請檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形， 若有請立即通知。細(xì)胞株請盡速開始培養(yǎng)， 或立即冷凍保存（置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2）。
 細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-96℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。
細(xì)胞計(jì)數(shù)：細(xì)胞濃度以5×05/ml為宜。
培養(yǎng)細(xì)胞將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時（或者24-48小時）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細(xì)胞情況而定。
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