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產品名稱 | 人鼻黏膜成纖維細胞 | 組織來源 | 鼻粘膜組織 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X1337 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
人鼻黏膜成纖維分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在人體內消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內壁的一層組織結構，由上皮組織和疏松結締組織構成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結構也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。成纖維細胞是結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
公司實驗室分離的人鼻黏膜成纖維采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過成纖維細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人鼻黏膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據(jù)實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養(yǎng)箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當?shù)霓D速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數(shù)與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數(shù)和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態(tài)。
人T淋巴細胞白血病細胞；A3 | 人胰腺癌細胞；PANC-1 |
人結直腸腺癌細胞；HCT116[HCT116] | SK-O330-Pro圓周型數(shù)顯搖床套裝 |
人神經母細胞瘤細胞；SH-SY5Y | SK-L180-Pro線性數(shù)顯搖床套裝 |
人乳腺癌細胞；MDA-MB-231 | 緩沖葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（MR-VP培養(yǎng)基） |
人前列腺癌細胞；22Rv1 | SK-O180-Pro圓周型數(shù)顯搖床套裝 |
急性髓系細胞白血病細胞；KG-1 | 胰蛋白胨酵母浸粉鐵瓊脂 |
人結直腸腺癌細胞；SW620[SW620；SW-620] | EMJH培養(yǎng)基基礎 |
大長舌果蝠肌肉細胞 | 淀粉銨鹽培養(yǎng)基 |
人結直腸腺癌細胞；HT-29 | SK-L330-Pro線性數(shù)顯搖床套裝 |
人肝癌細胞；Hep3B2.1-7 | LED數(shù)顯三維搖床，含托盤 |
人卵巢腺癌細胞；OVCAR-3 | LCD數(shù)控三維搖床(含18900155-通用培養(yǎng)皿托架套裝) |
人肝腹水腺癌細胞；SK-HEP-1 | LED數(shù)顯翹板搖床，含托盤 |
人卵巢腺癌細胞；SK-OV-3 | 人鼻黏膜成纖維細胞LCD數(shù)控翹板搖床(含18900155-通用培養(yǎng)皿托架套裝) |
人肺鱗癌細胞；SK-MES-1 | LCD 固定托盤圓周搖床，國標插頭，100-240V / 50/60Hz |
乙-1-萘酯 | LED 固定托盤圓周搖床，國標插頭，100-240V / 50/60Hz |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
