兔抗Dig血清抗體*,兔抗Dig血清抗體用于免疫組化實驗，WB實驗，相應的標記抗體有HRP標記抗體，F(xiàn)ITC標記，BIO等。

【貯存條件】： 貯存于-20℃. 本品應在低溫下保存，長時間在暴露在空氣中，含量會有所降低。

規(guī)格：0.5ml

材料和方法

　　. 材料 人成骨肉瘤MG63細胞為本實驗室保存。重組質(zhì)粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王巖教授惠贈。脂質(zhì)體 2000( Invitrogen公司)。高糖DMEM培養(yǎng)基(美國Gibco 公司)，胎牛血清(Hyclone公司)，和EDTA(Sigma 公司)。A2387，KN93，CaM，重組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain，Calbiochem)。抗體：Myc (9E0;Roche)，HA (3F0;Roche)，Pcofilin，Cofilin(Santa Cruz)， CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.)，PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒(邁晨科技有限公司)。

　　.2 蛋白印跡實驗 MG63細胞鋪于35 mmol/L培養(yǎng)皿中，待細胞密度達到60%～70%時，轉(zhuǎn)染MycSSHL，48 h后換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)3 h，分別加入濃度為0.5，，2.5，5 μmol/L的A2387孵育0 min后裂解細胞，離心取上清加入凝膠加樣緩沖液,沸水浴上加熱5 min，上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交〔一抗分別為Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯色。

　　.3 體外激酶測定 MycSSHL(WT)及其突變體MycSSHL(2 SA)分別轉(zhuǎn)染至MG63細胞，48 h后采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對照組為抗IgG抗體。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml重組活性CaMKⅡ(單獨或同時加入抑制劑KN93)以及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 于 20 μl 激酶反應緩沖液中，30℃反應40 min。反應產(chǎn)物進行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜，應用放射自顯影技術(shù)檢測32P 標記的SSHL水平。

　　.4 體外SSHL磷酸酶活性測定實驗 MycSSHL(WT)或MycSSHL (2 SA)轉(zhuǎn)染至MG63細胞，48 h后，采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對照組為抗IgG抗體。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨或同時加入抑制劑KN93)，20 μg/ml CaM，以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 于 20 μl 反應緩沖液(50 mol/L HEPES，pH 7.4，0. mol/L CaCl2，0.5 mol/L EDTA，3 mol/L MgCl2，00 mmol/L NaCl， mol/L dithiothreitol，0.5 mg/ml BSA， μg/ml leupeptin),中30℃反應2 h。反應產(chǎn)物進行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交(一抗分別為Pcofilin，Cofilin， cmyc 抗體)、ECL顯色。

本公司更多產(chǎn)品優(yōu)惠:

鼠抗人CD43        小鼠催產(chǎn)素OT抗體     0.5ml
550    鼠抗人CD45（LCA)       小鼠釋放激素GnRH抗體    0.5ml
55    鼠抗人CD45RO       小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH抗體    0.5ml
552    兔抗人、大鼠、小鼠CD54       小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素CRH抗體    0.5ml
553    鼠抗人CD57      小鼠促卵泡素FSH抗體    0.5ml
554    鼠抗人CEA        小鼠促甲狀腺素釋放激素TRH抗體    0.5ml
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556    鼠抗人、大鼠、小鼠CollagenⅣ      小鼠促黃體激素LH抗體    0.5ml
557    鼠抗人、大鼠、小鼠Pan Cytokeratin       小鼠雌三醇E3抗體    0.5ml
558    鼠抗人、大鼠、小鼠Cytokeratin 4        小鼠雌激素E抗體    0.5ml
559    鼠抗人、大鼠、小鼠Cytokeratin 8       小鼠雌二醇受體ER抗體    0.5ml