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土壤DNAout

更新時間:2013-06-26 點擊量:1060

土壤DNAout
產品及特點 由于土壤中有機質含量豐富,尤其是其中的腐殖酸對PCR等后續反應有的抑制作用,所以從土壤微生物提取高純度的DNA一直是十分棘手的問題。本產品是天澤基因精心優化的專門用于從各種土壤樣品和河海沉積物中提取高質量的DNA的試劑。
. 去污染效果好,OD260/280一般都在.8以上, OD260/340一般都在3.0以上(表示腐殖酸少),得到的DNA樣品原液或稀釋液可以直接用于PCR等后續反應。
2. 產量高,每克土壤一般可以提取到5 ug 左右DNA,片段長度在30 Kb左右。
3. 操作過程簡單快速,只需要30分鐘。
4. 擴容性好,既可以在.5 mL離心管中微量提取,也可以在50 mL離心管中進行大規模制備。
5. 試劑無毒無害, 環保。
規格及成分 成 份 30 次包裝 00 次包裝
溶液A 5 mL 50 mL
溶液B 5 mL 50 mL
使用手冊 份 份
注:溶液A和溶液B均為無色液體,溶液A 4℃保存時會產生沉淀,用前需要65℃溶化并混勻。

運輸及保存 常溫運輸及保存,有效期一年。
自備試劑 氯仿、無水乙醇、75%乙醇。
使用方法 . 65℃預熱溶液A,待其沉淀溶化后,充分混勻,取0.5 mL加入到.5 mL塑料離心管中并放置于65℃待用。
2. 稱取0.-0.3 g的土壤,加入到含預熱溶液A的離心管中,震蕩器上劇烈震蕩5-0分鐘。如果是擴量操作,可以使用更多土壤和較大離心管。也可以將同一種土壤在較大離心管中震蕩處理,然后再分到.5 mL離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管,一定要讓管底的土壤震蕩起來。
3. 將離心管置于65℃水浴中保溫至少5分鐘。
4. 3000-5000 g室溫離心3分鐘,將上清轉移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色,具體取決于腐殖酸的含量,上清的體積一般為300-400 µL)。
5. 在上清液中加入等體積的溶液B,上下顛倒30秒充分混勻,溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。
6. 將離心管冰浴至少5分鐘。
7. 3000-5000 g室溫離心3分鐘,轉移上清到新的.5 mL離心管中,上清液顏色將比第4步得到的上清的顏色稍淡,體積在0.7 mL左右。
8. 加入0.2 mL的氯仿(自備),震蕩器上充分振蕩30秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來。
9. 3000-5000 g室溫離心3分鐘,小心轉移上清到新離心管中。說明:離心后兩相交界面將有白色膜狀物,其中有機相部分顏色較深,一般呈淡棕色。上清的顏色取決于土壤中腐殖酸的含量。
0. 重復第8步和第9步一次。zui后將上清轉移到新的.5 mL離心管時,不要超過0.5 mL,否則沒有空間加兩倍體積的乙醇。如果有多余的可以棄之不用。
. 加入2倍體積的乙醇(自備),上下顛倒30秒混勻,5000 g離心5分鐘,棄上清,管底將有微小DNA沉淀,有時候呈棕色。注意:不要用異丙醇代替乙醇,否則腐殖酸更容易于DNA共沉淀。
2. 加入mL 75%乙醇,震蕩,3000-5000 g室溫離心3分鐘,棄上清。
3. 重復上步清洗一次。注意:75%乙醇洗兩次有助于去除部分腐殖酸。
4. 短暫離心,吸棄殘留的75%乙醇(約50uL),室溫晾干。注意:一定要去除殘留的75%乙醇,否則會影響后續反應和電泳上樣(樣品會飄走)。
5. 加入30 uL TE緩沖液溶解沉淀。注意:不知道樣品土壤DNA產率前不要加過多TE,如果DNA濃度高,可以再加TE稀釋。
6. DNA即可用于電泳、酶切和PCR等反應。 電泳時采取電泳后染色,因為實驗發現,殘留腐殖酸會吸附走大量的EB,使在腐殖酸后面的DNA不能染色。PCR時,按終體積的/0加入隨贈的PCR抑制物清除劑(CAT#:60804)。
 

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